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如何在弱熒光條件下獲取顯微圖像,一直是顯微鏡廠家和圖像采集裝置制造者一直在努力探求改善的課題。有越來(lái)越多的方法出現(xiàn)來(lái)改善這一狀況:
1)首先,應(yīng)該選取高質(zhì)量的熒光顯微鏡,和適用于不同熒光光譜的熒光物鏡;
2)清洗干凈的樣品載體(如載玻片、蓋玻片等),消除不必要的雜熒光干擾;
3)盡量完善的樣品制備;
4)選取合適的激發(fā)光源;
5)選取高敏感度和大動(dòng)態(tài)范圍的CCD,當(dāng)然也可能是EMCCD之類的;
在上述條件的基礎(chǔ)上,數(shù)碼攝像頭的調(diào)整可以適當(dāng)增加增益,但小心因之而引起的信噪比下降,還可以用過(guò)濾的方法盡量消除噪音信號(hào)。另外,想要降低數(shù)碼攝像頭的分辨率還可以使用bin,很多使用者在拍攝熒光圖像時(shí),也使用很高的分辨率,在通常情況下是得不償失的。
6)我們還可以通過(guò)增加曝光時(shí)間來(lái)達(dá)到這一目的,當(dāng)然要注意時(shí)間延長(zhǎng)對(duì)樣品的淬滅影響,如果可以,可以用一些抗淬滅劑;
7)當(dāng)然降低拍攝環(huán)境光線的干擾(背景光)也是非常重要的。
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